摘要: 本文对伤科七味片中的相关成分的含量进行了测定。希望对实际工作有所帮助。

关键词:伤科七味片; 相关成分; 高效液相色谱

   

    伤科七味片,主要由马钱子,红花,丁香,大黄等组成,具有祛瘀消肿,活血止痛的功效,用于跌打损伤,骨断血瘀等症。具有通络止痛，散结消肿的功效。对其有效成分的含量测定多采用紫外光谱法和薄层扫描色谱法，采用高效液相色谱法测定少见报道。马钱子为常用中药，始载于《本草纲目》，伤科七味片以马钱子为君药，配以三七、血竭等七味中药配制而成，为有效地控制产品质量，对其中士的宁碱采用高效液相色谱法进行含量测定。但其质量标准简单且无定量方法。本文探讨了用高效液相色谱法测定伤科七味片中士的宁含量的测定方法。该法灵敏度高,操作简单,结果准确,可用于伤科七味片中士的宁的含量测定。

   1 仪器与试药

   高效色谱仪:惠普HP1100;电子天平,塞多利思(德国)(型号:BP211DC十万分之一)士的宁对照品(中国药品生物鉴定所,含量测定用)。正己烷(A.R),二氯甲烷(A.R),甲醇(色谱纯),浓氨(A.R),其它试剂:分析纯。药品批号:020514,020517,020521(自制)。

   2 方法与结果

   2.1 色谱条件色谱柱为PHENOMENEX SILIC (2) (150 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为正己烷-二氯甲烷-甲醇-浓氨(42.5∶42.5∶5∶0.35),检测波长254 nm,柱温25℃,流速0.8 ml/min。

   2.2 标准曲线的制备称取4 mg左右于25 ml容量瓶中,精密称定,用醋酸乙酯溶解并定容至刻度。精密吸取1,5,10,15,20μl标准品溶液注入平衡好的色谱仪中,测定峰面积,以士的宁对照品峰面积为y轴,x为含量得线性回归方程为Y=235.89+2 178.63X,r=0.999 7,士的宁在0.164~3.28μg呈良好的线性关系(n=5)。

    2.3 样品溶液制备取20片研细,取粉末约1.5 g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加氯仿25 ml与浓氨水1 ml,密塞,轻轻振摇,称定重量,放置24 h,再称定重量,用氯仿补足减失重量,充分振摇,过滤,精密取10 ml滤液,置分液漏斗中,用硫酸溶液(3~100)提取5次,15 ml/次,合并硫酸溶液,加浓氯水调pH9~10,用氯仿提取5次,每次20 ml,合并氯仿液,减压蒸干,残渣加醋酸乙酯溶解,并转移至10 ml量瓶中,用酯酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得。

   2.4 阴性试验分别取红花0.5 g,延胡索干浸膏2.8 g,丁香0.5g,大黄1 g,血竭0.5 g,三七1 g,粉碎成细粉,和匀,照部颁第4部伤科七味片制备方法,制备缺马钱子阴性样品。伤科七味片阴

性溶液制备同样品溶液的制备。将样品溶液、对照品溶液、阴性溶液各取10μl,注入已平衡好的色谱仪中,绘制色谱图,结果,阴性对马钱子中士的宁的测定无干扰,且分离良好。

         A.阴性                                 B.对照品

      C.阴性+对照品                                 D.样品

          

                (a 士的宁对照品峰 时间:5.2 min)

               1 伤科七味片高效液相色谱图

    2.5 精密度试验在上述色谱条件下,精密吸取对照品溶液10μl注入色谱仪中,连续进样6针,间日进样3针,隔日进样3针,均记录峰面积,用峰面积计算相对标准偏差,其RSD同日为

0.30%,间日为0.23%,隔日为0.48%,说明仪器的精密度很好。

   2.6 稳定性试验取同一份供试品溶液,分别于2,4,6,8,10,12 h对样品进行分析用峰面积计算,其RSD为0.75%,说明样品稳定性很好。

   2.7 重复性试验取同一批样品5份,按“样品溶液制备”项下方法操作,测定并计算士的宁的含量,其平均值为0.14%,RSD为0.74%。

   2.8 加样回收试验取已知含量的同一批样品5份,每份约0.75g,精密称定,分别加入对照品溶液3.5 ml(浓度为0.328 mg/ml),按“样品溶液制备”项下方法操作,测定并计算士的宁加样回收率,结果见表1。

                   表1 加样回收试验结果

  2.9 样品测定按样品溶液制备项下方法制备供试液样品溶液,取10μl注入已平衡好的色谱仪中,记录色谱峰面积,以外标法计算。结果见表2。

             表2 伤科七味片中士的宁含量批号每片含量m/mgRSD(%)

   n=4

3 讨论

3.1 延胡索干浸膏中虽然含有生物碱,但该生物碱是季铵型不干扰测定。

3.2 本试验使用ODS反相柱,分离效果不理想,使用正相柱可得到良好的分离。

3.3 本方法简便、重现性好、精密度好、可用于伤科七味片的含量测定。

参考文献:

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[3] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].北京:化学工业出版社,2000:37-37.

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